Материалы медицинских конференций

Главная / Материалы медицинских конференций / 2003 / VII Междисциплинарная конференция по биологической психиатрии «Cтресс и поведение»

Новые подходы к диагностике рассеянного склероза и его лечению

Рассеянный склероз (РС) - одно из немногих неизлечимых неврологических заболеваний с неясной этиологией и недостаточно исследованными механизмами. Основными внешними причинами РС обычно считаются (Гусев и др., 1997а) ранее перенесенные инфекционные болезни, токсические факторы и психоэмоциональные стрессы. В отличие от таких неизлечимых нервных болезней, как болезнь Альцгеймера или болезнь Паркинсона, поражающих в основном людей преклонного возраста, РС охватывает людей в молодом и среднем возрасте. РС встречается, прежде всего, среди городского населения и преимущественно в крупных индустриальных центрах. По характеру развития болезни различают: 1) острую (обычно очень тяжелую) хронически монотонно прогрессирующую форму, в течение нескольких лет приводящую к гибели больного, и 2) волнообразную хроническую форму с чередующимися периодами обострения болезни и периодами ремиссии, т.е. временного ослабления болезни, с каждым циклом принимающую всё более тяжелую форму. В такой форме болезнь может продолжаться долго, даже в течение не одного десятилетия, и тяжело переносится больными. РС начинается с возникновения аутоиммунной реакции к миелину. Она создает небольшие участки воспаления, так называемые бляшки, - углубления и даже прободения оболочки, которые нарушают изоляционные свойства оболочки в этом месте. По широко распространенному мнению, именно эти бляшки и являются первичной причиной всех тяжелых проявлений РС: нарушение чувствительности, онемение конечностей, нарушение способности к движению в пространстве, нарушение равновесия, острые боли, поражения зрения, нарушения памяти и нормальной психической деятельности. Влияние этого процесса на серое вещество коры, содержащее всю массу нейронов, осуществляющее основные регуляторные функции и ответственное за память и высшие психические функции, исследовалось далеко не так интенсивно, так как в сером веществе миелин почти полностью отсутствует.

Эта точка зрения, хотя и нередко вызывавшая некоторое сомнение, сыграла свою положительную роль, приведя к магниторезонансной терапии, которая, определяя число и размеры бляшек, служила неплохим, хотя и довольно дорогим методом диагностики РС. Несмотря на отсутствие ясных представлений о механизме возникновения и развития РС, за последние годы был достигнут заметный прогресс в его лечении: возникла глюкокортикоидная терапия, внутривенная лазерная терапия, стали применяться иммуномодулятор бетаферон и пептидный препарат копаксон, способный вызвать толерантность к миелиновым антигенам, и некоторые другие новые лекарственные средства. К сожалению, все эти средства лечения лишь временно облегчают состояние больного, не вылечивая его, и, к тому же, оказывают позитивное действие далеко не на всех больных, а иногда даже у отдельных больных дают и негативные результаты. Разнообразными биохимическими методами были установлены заметные изменения в сыворотке крови больного РС в фазе обострения. Прежде всего - это появление антител к миелину и миелин-ассоциированному гликопротеину. Кроме того, отмечается увеличение содержания противовоспалительных цитокинов: интерлейкинов IL-I, IL-2, IL-6, и, кроме того, TNF-альфа (фактора некроза опухолей). Было установлено, что РС вызывает нарушение проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ), что позволяет многим молекулярным компонентам сыворотки крови больных РС проникать в кору головного мозга. Мы концентрировали наше внимание на влиянии сыворотки крови больных РС на функционирование нейронов неокортекса.

МЕТОДИКА. Опыты выполнялись на инкубируемых in vitro срезах неокортекса морских свинок. Животных массой 250-400 г декапитировали с помощью гильотины. Механическим слайсером приготовляли фронтальные срезы сенсомоторной коры толщиной около 500 мкм и помещали в экспериментальный отсек термостатируемой камеры. С помощью перистальтических насосов через камеру осуществлялся проток насыщенного карбогеном раствора (35^oC) следующего состава (в ммоль/л): NaCl - 131.5, KCl - 5, KH₂PO₄, - 1.24, CaCl₂ - 2, MgSO₄ - 2, NaHCO₃ - 13.5, глюкоза - 10. Раздражающий вольфрамовый биполярный электрод помещался вблизи границы белого и серого веществ, а отводящий стеклянный электрод с диаметром кончика около 10 мкм, наполненный 0.1 М раствором NaCl, - в области IV-V слоев коры в одной проекции со стимулирующим. Регистрировали вызванные популяционные ответы (ПО) нейронов среза. В инкубирующую среду вводилась сыворотка крови больного РС в объеме, составлявшем 20% от общего объема инкубирующей среды.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. После введения сыворотки больного РС в стадии обострения амплитуда ПО сравнительно быстро (в течение 30 мин.) снижалась в несколько раз в зависимости от тяжести заболевания. Если же вводилась сыворотка больного РС в стадии ремиссии, то амплитуда ПО повышалась на 30-100%. Амплитуда ПО не менялась, если в инкубирующую среду вводилась сыворотка крови здоровых людей в том же объеме или больных пациентов, но не РС. Таким образом, эта методика позволяла выявить заболевание РС у пациента, определить степень тяжести и стадию заболевания, и была специфичной к РС (Жадин и др., 2000). На этой основе нами была предложена новая тест-система для диагностики РС. Она была успешно апробирована в 55-ой клинической больнице г. Москвы опытными неврологами (Федин и др., 2001) при внутривенной низко-интенсивной лазерной терапии. В процессе работы была выявлена гибкость предложенной тест-системы, чувствительной к сравнительно быстрым сдвигам в состоянии больного. В результате открылись перспективы оценки степени эффективности того или иного курса лечения больного на сравнительно ранней стадии этого курса и целесообразности своевременной корректировки или замены его другим курсом лечения, более эффективного для данного пациента.

Что не менее важно, предложенная тест-система оказалась чувствительным инструментом для выявления вредных компонентов сыворотки крови больного РС, ингибирующих нейроны неокортекса. Совместно с группой к.х.н. О.Е. Трубецкой в Филиале Института биоорганической химии РАН нами было показано, что фракция белков орозомукоидов, участвующих в апоптозе и в регуляции иммунного ответа организма, будучи выделенной из сыворотки крови больных РС, оказывает такое же ингибирующее действие на активность нейронов среза, что и сама сыворотка. Это позволяет полагать, что орозомукоиды являются одним из компонентов сыворотки, осуществляющих это вредное влияние на корковые нейроны. Кроме того, введение в инкубирующую среду того или иного специфического блокатора синаптических рецепторов корковых нейронов поможет выявить эти вредные компоненты сыворотки в крови больных РС. Если окажется, что какой-либо блокатор купирует ингибирующее действие сыворотки, то это указало бы на химическую природу искомого вредного компонента и помогло бы разработать лекарство, разрушающее идентифицированный компонент или блокирующее его действие на корковые нейроны.

ВЫВОДЫ. Показано, что в фазе обострения рассеянного склероза в сыворотке крови больного присутствуют компоненты, ингибирующие активность корковых нейронов. Предложена новая тест-система для диагностики рассеянного склероза. Эта тест-система чувствительна к сравнительно быстро меняющемуся состоянию пациента и фазе рассеянного склероза. На основе этой тест-системы возможна оперативная оценка эффективности начатого курса лечения рассеянного склероза, дающая информацию о целесообразности корректировки или смены этого курса. Указанная тест-система открывает возможности идентификации компонентов сыворотки крови больного рассеянным склерозом, оказывающих ингибирующее действие на активность корковых нейронов.